کاربرد روشPCR-RFLP ژنوم کلروپلاست جهت ارزیابی هاپلوتایپی برخی ژنوتیپ‌های چای موجود در ایران

نوع مقاله : علمی پژوهشی

نویسندگان

پژوهشکده چای، مؤسسه تحقیقات علوم باغبانی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، لاهیجان، ایران

چکیده

روش واکنش زنجیره‌ای پلیمراز- تفاوت طول قطعات حاصل از هضم (PCR-RFLP) برای اولین بار در ایران برای ارزیابی و مشخص نمودن روابط هاپلوتایپی و ساختار جمعیتی در 14 ژنوتیپ چای از سه کشور ایران، هند (آسام) و ژاپن بکار رفت. سه آغازگر عمومی کلروپلاست (HK، CS و B1B2) و چهار آنزیم برشی (HinfI، AluI، PstI و BglI) در این بررسی استفاده شدند و از ژل آگارز برای تفکیک باندها استفاده شد. آغازگر B1B2 به علت تولید چندین باند در این بررسی قابل بهره‌برداری نبود. همچنین آغازگر CS پس از برش، چندشکلی ایجاد نکرد و فقط برش قطعات حاصل از آغازگر HK و آنزیم HinfI حالت چند شکلی نشان داد. جهش‌های مشخص شده توسط ترکیب آغازگر- آنزیم برشی HK- HinfI جهش‌های حذف- اضافه در محدوده bp50-20 بودند که نمونه‌ها را در پنج هاپلوتایپ (H1، H2، H3، H4 و H5) گروه‌بندی نمودند. توزیع نمونه‌ها در گروه‌های هاپلوتایپی با توزیع جغرافیایی همخوانی نداشت و هیچ هاپلوتایپی خاص یک سری نمونه نبود. با توجه به نتایج می‌توان بیان کرد که روش PCR-RFLP روشی مناسب برای بررسی تنوع ژنتیکی ژنوتیپ‌های چای در سطح اندامکی می‌باشد.

کلیدواژه‌ها


عنوان مقاله [English]

Application of PCR-RFLP method of chloroplast genome for haplotype evaluation of some tea genotypes in Iran.

نویسندگان [English]

  • Shahin Jahangirzadeh Khiavi
  • sanam safaei chaeikar
Tea Research Center, Horticultural Sciences Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Lahijan, Iran
چکیده [English]

The PCR-RFLP method was used for the first time in Iran to evaluate and determine haplotype relationships and population structure in 14 tea genotypes from three countries: Iran, India (Assam) and Japan. Three universal chloroplast primers (HK, CS and B1B2) and four restriction enzymes (HinfI, AluI, PstI and BglI) were used in this study and agarose gel was used to separate the bands. The B1B2 primer could not be used in this study due to the production of several bands. Also, the DT primer produced a monomorphic state after cutting, and only the fragments obtained from the HK primer and HinfI enzyme showed a polymorphic state. The mutations identified by the primer-cutting enzyme HK-HinfI were deletion-addition mutations in the range of 20-50 bp, which grouped the samples into five haplotypes (H1, H2, H3, H4 and H5). The distribution of samples in haplotype groups did not correspond to the geographical distribution, and there was no specific haplotype of a sample series. According to the results, it can be said that the PCR-RFLP method is a suitable method for investigating the genetic diversity of tea genotypes at the organ level.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Camellia
  • Genetic relationship
  • PCR
  • Molecular marker